因?yàn)樽贤馕諟y(cè)試的時(shí)候需要測(cè)的是光線通過(guò)比色皿前后的差別，光是直線的，所以?xún)擅嫱腹饩蛪蛄恕６鵁晒鉁y(cè)試的需要一束激光照在比色皿上，然后在另外一邊檢測(cè)溶液的發(fā)光。
由于光是直線傳播的，所以檢測(cè)器不能在激光源的對(duì)面放置（如果放在光源的對(duì)面，檢測(cè)的就是光源的光譜），事實(shí)上檢測(cè)器，光源和比色皿之間是90度角的關(guān)系，所以熒光比色皿需要四面全透。
熒光光度計(jì)收集的是受激分子發(fā)射的光譜。為了避免激發(fā)光，反射光進(jìn)入檢測(cè)器而造成誤差，入射光源和檢測(cè)器的方向垂直。
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
